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次氯酸鈣金黃色pu萄球菌滅活效果檢測技術規范與方法優化研究

發布時間： 2025-09-30　　點擊次數： 47次

次氯酸鈣金黃色pu萄球菌滅活效果檢測技術規范與方法優化研究
一、檢測原理與標準依據
（一）殺菌機制
次氯酸鈣溶于水釋放次氯酸（HClO），通過以下途徑殺滅金黃色pu萄球菌（StaphylococcusaureusATCC6538）：
1.細胞膜破壞：HClO穿透細胞壁，氧化磷脂雙分子層；
2.蛋白質變性：與酶活性中心巰基（-SH）反應，抑制代謝酶活性；
3.DNA損傷：破壞核酸結構，阻止細胞復制1。
（二）標準方法
國標：GB/T27954-2020《消毒劑衛生要求》懸液定量殺滅試驗；
國際標準：EN13704《化學消毒劑和防腐劑食品、工業、家庭和公共區域用化學消毒劑殺菌活性評價》2。
二、試驗材料與試劑配制
（一）菌株與培養基
1.標準菌株：金黃色pu萄球菌ATCC6538，由中國普通微生物菌種保藏中心提供；
2.培養基：營養瓊脂（NA），pH7.0±0.2，121℃滅菌20分鐘1。
（二）關鍵試劑
1. 次氯酸鈣溶液：
母液：稱取0.5g次氯酸鈣（有效氯65%），用無菌水溶解定容至100mL，有效氯濃度3250mg/L；
工作液：用PBS稀釋至500mg/L（按殺滅要求調整）3。
中和劑：
0.1%硫代liu酸鈉（Na?S?O?）溶液，中和有效氯至＜0.1mg/L1。
三、試驗流程與操作規范
（一）菌懸液制備
1.活化培養：
將凍干菌種接種至NA斜面，37℃培養18-24小時；
挑取單菌落轉接至營養肉湯，37℃振蕩培養6小時（對數生長期）。
稀釋與干擾物添加：
用0.03mol/LPBS（含10%小牛血清）稀釋菌液至1×10?CFU/mL；
混勻后備用，2小時內使用2。
（二）殺滅試驗步驟
樣品處理：
取5mL次氯酸鈣工作液（500mg/L）至滅菌試管，37℃水浴預熱5分鐘；
加入5mL菌懸液（1×10?CFU/mL），立即計時并混勻。
作用與終止：
20℃±1℃避光作用10分鐘（按產品說明書調整作用時間）；
取1.0mL混合液至9.0mL中和劑，混勻后靜置10分鐘1。
培養與計數：
取中和后液體1.0mL，用PBS梯度稀釋（10?1-10?3）；
各稀釋度取0.5mL傾注NA平板，37℃培養48小時，計數菌落數（CFU）2。
（三）對照組設置
對照組類型操作步驟作用
陽性對照組菌懸液+PBS（不加消毒劑）驗證菌活性
陰性對照組中和劑+培養基驗證無菌操作
中和劑對照組消毒劑+中和劑+菌懸液驗證中和劑有效性
四、結果計算與判定標準
（一）殺滅率計算
殺滅率（）
符號說明：
試驗組活菌數（CFU/mL）；
陽性對照組活菌數（CFU/mL）1。
（二）判定標準
產品類型作用時間（min）有效氯濃度（mg/L）殺滅率要求（%）
物體表面消毒劑10500≥99.99
手消毒劑1.51000≥99.999
五、影響因素與優化策略
（一）關鍵因素控制
因素優化條件效果
有效氯濃度500-1000mg/L（根據有機物調整）殺滅率提升至99.99%
作用pH6.5-7.5（中性條件）HClO占比達80%以上
溫度20-25℃溫度每升高10℃，殺滅時間縮短一半
（二）常見問題解決方案
問題現象原因分析解決措施
殺滅率偏低有效氯濃度不足或中和劑過量重新標定濃度，調整中和劑用量至9mL
菌落蔓延菌懸液濃度過高增加稀釋梯度至10??
中和劑失效硫代liu酸鈉氧化使用新鮮配制的中和劑
六、質量控制與應用場景
（一）質控指標
1.菌懸液濃度：1×10?±0.5×10?CFU/mL；
2.中和劑有效性：中和后殘留菌數≤10CFU/mL2。
（二）典型應用
1.醫療環境表面：物體表面擦拭后殺滅率≥99.99%；
2.食品加工設備：消毒后金黃色pu萄球菌殘留≤10CFU/cm21。
關鍵詞：次氯酸鈣；金黃色pu萄球菌；殺滅率；懸液定量試驗；GB/T27954
參考文獻
[1]GB/T27954-2020消毒劑衛生要求[S].
[2]EN13704化學消毒劑殺菌活性評價[S].
[3]WHO飲用水消毒指南[S].

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